Химический синтез белков в промышленности

                              Биосинтез белков



    Каковы же основные формы связи аминокислот в сложной молекуле белка?
Ещё в 1891 г. А. Я. Данилевский высказал предположение, что это амидные
связи, образованные карбоксилом одной молекулы аминокислоты и аминогруппой
другой (поликонденсация типа “голова – хвост”), например:
                                                       -H2O
        H2N-CH2-C=O  +HNHCH2COOH--(
                \
                 OH
( H2N-CH2-CO-NH-CH2-COOH
        (пептидная связь)

    Амидные связи этого типа называются пептидными связями,а
низкомолекулярные соединения, в которых аминокислоты соединены друг с
другом пептидными связями, принято называть пептидами (или полипептидами).
    Пептиды образуются при частичном гидролизе белков. Пептидная теория
строения белка была развита Э. Фишером и Гофмейстером и в настоящее время
окончательно подтверждена.
    В зависимости от числа аминокислотных остатков, входящих в молекулу
полипептида, различают дипептиды, трипептиды, тетрапептиды и т. д. .
Характерную для пептидов группировку
      -CO-NH- называют пептидной.
    Названия полипептидов производят от названий остатков аминокислот,
прореагировавших своими карбоксильными группами, и от названия
аминокислоты, реагирующей своей аминогруппой и сохраняющей свободную
карбоксильную группу:

       H2N-CH2-CO-NH-CH(CH3)-COOH
                         глицилаланин(H-гли-ала-OH)
 NH2-CH(CH3)-CO-NH-NH2-CO-NH-CH2-COOH
                    Аланилглицилглицин(H-ала-гли-гли-OH)
    К настоящему времени разработано много методов превращения
  а-аминокислот в пептиды и синтезированы простейшие природные белки
–инсулин, рибонуклеаза, вазопрессин, окситоцин и др.
    Для того чтобы соединить две аминокислоты пептидной связью, необходимо:
а) закрыть (защитить) карбоксильную группу глицина и аминогруппу аланина,
чтобы не произошло нежелательных реакций по этим группам; б) образовать
пептидную связь; в) снять защитные группы. Защитные группы должны надёжно
закрывать аминную и карбоксильную группы в процессе синтеза и потом легко
сниматься без разрушения пептидной связи.
    Защита аминогруппы наиболее просто проводится ацилированием:


                  -HCl
R-COCl+H2N-CH-COOH--(R-CO-NH-CH-COOH
           |                  |
          CH2                 CH3

Карбоксильную группу для защиты превращают в сложноэфирную:
                   -HOH
    H2N-CH2-COOH+HOR--( H2N-CH2-COOR
 Для образования пептидной связи или активируют карбоксильную группу N-
ацилаланина, превращая его в хлорангидрид, или проводят конденсацию в
присутствии сильных водоотнимающих веществ (дициклогексилкарбодиимид,
этоксиацетилен):
                                                      -H2O
   R-CO-NH-CH-COOH+HNHCH2-COOR--(
            |
           CH3                           гидролиз
( R-CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOR----(
             |
            CH3
( H2N-CH-CO-NH-CH2-COOH
       |
      CH3
     Затем снимают защитные группы в таких условиях, чтобы не затрагивалась
пептидная связь. Таким образом можно синтезировать не только ди-, но и три-
, и тетрапептиды и т. д. .
    Очень перспективный метод синтеза пептидных связей предложил в 1960 г.
Мерифильд (США). Этот метод потом получил название твёрдофазного синтеза
пептидов. Первая аминокислота с защищённой аминогруппой присоединяется к
твёрдому носителю – ионнообменной смоле, содержащей первоначально группы
–CH2Cl (1-ая стадия), с образованием так называемой “якорной” связи,
которая обозначена жирной линией:                                   (1)-
NaCl
 Смола-CH2Cl+NaOOC-CHR-NHCOR’(Смола-    -CH2O-C-CHR-NHCOR’(Смола-CH2O-C-CHR-

     ||                      ||
     O                        O
    +HOOC-CHR’’-NHOR(3)
-NH2-----------(Смола-CH2O-C-CHR-
                          ||
                 (4)        O
-NHCO-CHR’’-NHCOR’(Смола-CH2O-C-CHR--NHCO-CHR’’-NH2 и т. д.          ||
                              O
    Затем наращивают пептидную цепь, пропуская через смолу растворы
соответствующих реагентов. Для этого сначала убирают группу, защищающую
конечную NH2 – группу (2-ая стадия). Пропуская через смолу раствор другой
аминокислоты с защищённой аминогруппой в присутствии водоотнимающих
реагентов, образуют пептидную связь между первой и второй аминокислотой (3-
я стадия). Если затем убрать защитную группу (4-ая стадия), синтез пептида
можно вести далее. После наращивания пептидной цепи до нужной величины
гидролизуют “якорную” сложноэфирную связь и смывают полипептид со смолы:
                                                       HBr
Смола-CH2O-CO-CHR-NH…CO-CHR’NH2---(
(Смола-CH2OH+HOOCCHRNH…COCHR’NH2
               Полипептид
    Метод Мерифильда прост в техническом оформлении, что позволяет
полностью автоматизировать процесс. Поэтому, хотя вышеупомянутые белки
инсулин(51 аминокислота) и рибонуклеаза(124 аминокислоты) были
синтезированы классическими методами, метод Мерифильда позволяет
значительно сократить затраты труда и времени на синтез белков. Так,
рибонуклеаза была синтезирована Мерифильдом в 1968 г. менее чем за месяц,
хотя синтез включал 369 последовательных реакций.
                                  Чеботарёв А. 11п1